Автори
Автори
- Головні автори :
- Д-р Алан Тененбаум
- Мауро Тіціані - Томас Юнг Джун Кім
- Ромуло Мене
01
Група
дослідників
N= 29 (кількість) лабораторний щурів типу Wistar
Вага щура : 421 г.
Походження щурів : Biotério Central of Campus of Ribeirão Preto of São Paulo University
Технічне обслуговування : Experimental Pathology Lab of Pathology Department on Medicine School of Ribeirão Preto – USP
Утримання тварин : поліпропіленові коробки
Їжа тварин : основна лабораторна дієта з водою
Умови освітлення : природні світло/темрява цикли під контролем основних параметрів
Експериментатори : A.Tenenbaum,R.Mené,M.Kim,M.Tiziani
02
Підготовка тварин та гістологічних зразків
Миші були евтаназійовані в CO2 камерах.
- Розріз шкіри лезом № 23
- Знаходження та виділення претибіального м'яза ножицями Меценбаума
- Розтин сухожиль ножицями Мейо.
- Фіксація ділянок м'язів на зрізах коркового дуба
- Заливка з використанням 50% розчину формальдегіду - 10% буферного і 50% чистого парафіну для звичайного оптико-мікроскопічного дослідження.
- Фарбування зрізів як рутинний гістологічний процес.
- Використаний мікротом: Leika RM 2155
- Забарвлення м'язових зрізів за допомогою:
-гематоксилін-еозин
-Трихром Массона
-червоний пікро-сіріус..
- Гістологічне дослідження проводили за допомогою звичайного мікроскопа (Olympus BH2).
- Спостереження під поляризаційною лампою.
- Фотографічна документація була реалізована за допомогою мікроскопа Leika DMR, з’єднаного з цифровою камерою Leika CD 300F і сумісним ПК.
03
Матеріал
- Тварини були розділені на 6 коробок, щоб коробки від номеру 1 по 5 мали по 5 щурів, коробка номер 6 містила 4 щура.
- Усім тваринам проводили оцінку ходи за відбитком сліду на спеціальному папері та попереднім зануренням задніх лап у мильний розчин.
- Коробка 1 мала контрольну групу, яка отримала аплікацію 0,1 мл фізіологічного розчину (NaCl 0,9%) на правий претибіальний м'яз.
-
Миші з коробок 2 по 5 отримували 0,1 мл основного продукту Ендопіл Оригінал (Endopeels Original) на той самий м'яз, що й у контрольній групі.
-
Коробка 6 складалася з 4 щурів, кожному з яких підшкірно вводили по 0,5 мл основного продукту Ендопіл.
-
Усіх тварин оцінювали за ходою до і після відповідних ін'єкцій.
04
Методи
Оцінка ходи
Для реєстрації відбитків ніг щурів використовували смужки паперу розміром 43 см завдовжки і 8,7 см завширшки - розміри, які вважаються адекватними для "подіуму" щурів і побудовані відповідно до малюнка De MEDINACELI; FREED; WYATT (1982). Використовували папір, попередньо замочений у розчині бромфенолового синього.
Для приготування паперу бромфеноловий синій в безводній формі (Sigma) розводили в 1% абсолютному ацетоні, набуваючи оранжевого кольору.
Аркуші паперу змочували в цьому розчині і розміщували на сонці для просушування, потім нарізали на смужки і зберігали в поліетиленових пакетах, щоб уникнути вологості, яка могла б змінити синій колір.
Тварин спонукали ходити по поверхні, вкритій заздалегідь підготовленими паперовими смужками, задніми лапами, змоченими в розчині нейтрального миючого засобу, який відразу змінює колір відбитка з жовтого на синій. Сліди залишаються на паперових смужках, які були залишені для висихання для зчитування необхідних показників для розрахунку функціонального індексу сідничного нерва.
Пізніше вони були проаналізовані за допомогою комп'ютерної програми (програмного забезпечення), розробленої SELLI (1998), для отримання сідничного функціонального індексу, запропонованого BAIN; MACKINNON; HUNTER (1989), який враховує довжину відбитка, загальний розмах пальців стопи між 1-м і 4-м пальцями, а також проміжні пальці - 2-й і 3-й пальці. Відбитки стоп кожної тварини були отримані до нанесення ендопілу, як контроль, і відразу після ін'єкції ендопілу, а також повторно і через певні проміжки часу, коли тварини були препаровані для вилучення переднього великогомілкового м'яза для гістологічного дослідження.
Розрахунок та вимірювання сідничного функціонального індексу або SFI
Схематичне зображення вимірювань, проведених для розрахунку сідничного функціонального індексу.
Е: експериментальна (прооперована нога);
N: нормальна (протилежна нога);
TS: Загальне розкриття пальців стопи (з 1-го по 5-й);
IT: Розкриття проміжних пальців (з 2-го по 4-й);
PL: Довжина стопи
Програма для вимірювання сідничного функціонального індексу SFI
Аналіз ходи
